酶法从银杏叶中提取银杏黄酮的工艺研究

2.2 仪器设备

高效液相色谱仪（HPLC，Agilent 1260 Infinity）

恒温水浴锅（HH-6，上海精宏实验设备有限公司）

pH计（PHS-3C，上海雷磁仪器厂）

离心机（TDL-5-A，长沙湘智离心机仪器有限公司）

2.3 实验方法

2.3.1 银杏黄酮的提取

取10 g银杏叶粉末，加入一定体积的磷酸缓冲液（pH值根据实验设定），调节至设定的pH值。按一定比例加入酶制剂，在恒温水浴中反应指定时间，搅拌保持均匀。反应结束后，水浴加热至80℃灭酶10分钟。

2.3.2 提取液的处理

提取液经离心（4000 rpm，10 min）后，取上清液，加入等体积的95%乙醇，混匀后静置12小时，使杂质沉淀。再次离心后，取上清液供测定。

2.3.3 银杏黄酮含量的测定

采用高效液相色谱法（HPLC）测定银杏黄酮的含量。色谱条件：C18反相柱（250 mm × 4.6 mm，5 µm）；流动相为甲醇-水（体积比70:30）；检测波长为370 nm；流速1.0 mL/min；进样量20 µL。

2.4 单因素实验设计

考察以下因素对银杏黄酮提取率的影响：

酶的种类和配比：纤维素酶、果胶酶、纤维素酶与果胶酶按1:1混合

酶用量（占原料质量的百分比）：1.0%、2.0%、3.0%、4.0%

温度：30℃、40℃、50℃、60℃

pH值：3.0、4.0、5.0、6.0、7.0

反应时间：1 h、2 h、3 h、4 h

3 结果与讨论

3.1 酶的种类和配比对提取率的影响

在酶用量2.0%、温度50℃、pH 5.0、反应时间2小时的条件下，考察不同酶的种类和配比对银杏黄酮提取率的影响。结果如图1所示。

图1 不同酶种类对银杏黄酮提取率的影响

结果表明，纤维素酶与果胶酶按1:1混合使用时，银杏黄酮提取率最高，达到7.8%。这可能是由于纤维素酶和果胶酶协同作用，更有效地破坏了细胞壁，释放出更多的银杏黄酮\[5\]。